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?小鼠轉(zhuǎn)錄因子T-bet(T-bet)ELISA試劑盒實驗使用說明書主要包括以下內(nèi)容?：
貨號：BS-9406 小鼠轉(zhuǎn)錄因子T-bet(T-bet)ELISA試劑盒
一、實驗準備
?試劑盒保存與平衡?：試劑盒應(yīng)保存在2-8℃條件下，使用前需室溫平衡20分鐘?。
?實驗器材準備?：準備必要的實驗器材，如酶標儀(450nm)、高精度加樣器及槍頭、37℃恒溫箱等?。
二、樣本收集與處理
?血清?：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管收集血液，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘分離血清和紅細胞?。
?血漿?：采用EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清?。
?細胞上清液?：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物?1。
?組織勻漿?：將組織加入適量生理鹽水搗碎，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。若樣本不及時檢測，應(yīng)按一次用量分裝并凍存于-20℃?。
三、實驗步驟
?加樣?：
在酶標包被板上設(shè)定標準品孔、待測樣品孔和空白孔。
標準品設(shè)定5個濃度點，每個濃度設(shè)定平行孔，加入50微升不同濃度的標準品。
待測樣品孔先加樣品稀釋液40微升，再加待測樣品10微升(最終稀釋度為5倍)。
空白孔加入50微升蒸餾水?。
?溫育?：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘?。
?配液?：將濃縮洗滌液按倍數(shù)稀釋后備用?。
?洗滌?：揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)5次，拍干?。
?加酶?：每孔(除空白孔外)加入酶標試劑50微升?。
?再次溫育?：操作同第一次溫育步驟?。
?再次洗滌?：操作同洗滌步驟?。
?顯色?：每孔先加入顯色劑A50微升，再加入顯色劑B50微升，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘?。
?終止?：每孔加終止液50微升，終止反應(yīng)(顏色由藍轉(zhuǎn)黃)?。
?測定?：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下依序測量各孔的吸光度(OD值)，測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行?。
四、注意事項
試劑盒僅用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷?。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封并低溫干燥保存?。
嚴格按照說明書操作，避免交叉污染和試劑浪費?3。
五、實驗室自備器材試劑
96孔讀板儀器
自動洗板機
移液器和槍頭(建議使用多通道移液器/排槍)
Eppendorf管
洗板緩沖液(如neutral PBS或TBS，試劑盒內(nèi)提供足量，如需額外緩沖液可參考配方配制)?4請按照說明書嚴格操作，以確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性。
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